LyoDt® Reagen Deteksi PCR Real-Time untuk Cronobacter bubuk beku kering

LyoDt® Reagen Deteksi PCR Real-Time untuk Cronobacter bubuk beku kering

1.Pengantar

Cronobacteradalah genus bakteri yang baru didefinisikan, yang pendahulunya adalahEnterobacter sakazakii. Cronobacteradalah patogen makanan yang parah yang terutama ditularkan melalui susu formula yang terkontaminasi, menyebabkan meningitis neonatal, sepsis, dan enterocolitis nekrosis. Tingkat kematian dapat mencapai 80%.

Produk ini adalah reagen PCR real-time beku kering untuk deteksiCronobacterIni menggunakan gen ompA yang sangat terkonservasi dariCronobacterIni adalah campuran utama yang mengandung semua bahan yang diperlukan, kecuali DNA templat, dan sudah didistribusikan sebagai tes tunggal dalam tabung PCR untuk penggunaan yang mudah.Produk ini tidak memerlukan rantai dingin untuk transportasi dan penyimpanan, yang secara signifikan mengurangi biaya pengiriman, dan menghilangkan kemungkinan kerugian akibat limbah reagen dan kontaminasi aerosol.

2. Spesifikasi & Komposisi

3. Penyimpanan Dan jangka waktu

Simpan pada suhu sekitar (5-30°C). Ini stabil hingga 12 bulan. Setelah pembungkus vakum dibuka, simpan produk yang tidak digunakan dalam kantong plastik yang dapat disegel kembali dengan pengering,dan dalam kantong aluminium foil.

Perhatian:

Pellet reagen yang semakin kecil adalah indikasi kelembaban yang meresap ke tabung dan reagen menjadi lembab.Setiap reagen dengan ukuran pelet yang jauh lebih kecil dari biasanya harus dibuang atau diuji dengan kontrol positif sebelum digunakanuntuk pengujian sampel.

4Perlengkapan tambahan dan reagen diperlukan.

1) Instrumen PCR real-time

2) Pipet dan tip

3) Air bebas nukleasa

4) Kit ekstraksi asam nukleat

5. Kompatibel real-time PCR sistem

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. SPECIMEN yang dapat diterima

Sup pengayaan makanan, muntah, sampel diare, dll.

7. Prosedur Operasi

1) Ekstraksi asam nukleat

Ekstrak DNA dari sampel menggunakan kit ekstraksi yang tepat.Disarankan bahwaDNAdieluasi dengan sekitar 100μl buffer eluasi(TEatauH bebas nuklease₂O) pada tahap akhir dariekstraksi.Asam nukleat yang dimurnikan harus segera digunakan atau disimpan pada suhu -20°C.

2) Persiapan Kontrol Positif

Kontrol positif dapat disimpan pada suhu sekitar sebelum rehidrasi selama 12 bulan.₂O, berputar pada kecepatan rendah selama 15-20 detik, dan disentrifikasi pada kecepatan rendah selama 15-20 detik.

3) Persiapan Campuran PCR Real-Time

A) Buka bungkus vakum dan keluarkan strip 8 tabung yang berisi reagen. periksa pelet berada di bagian bawah tabung (potong jumlah tabung yang diperlukan jika diperlukan).Jika tabung yang disediakan tidak kompatibel dengan instrumen Anda, pindahkan pelet reagen ke tabung optik yang kompatibel dengan instrumen Anda.

B) Buka tabung dan buang tutupnya (tidak cocok untuk mesin PCR real-time), dan persiapkan campuran reaksi pada es seperti di bawah ini.

langkah dariekstraksi.Asam nukleat yang dimurnikan harus segera digunakan atau disimpan pada suhu -20°C.

2) Persiapan Kontrol Positif

Kontrol positif dapat disimpan pada suhu sekitar sebelum rehidrasi selama 12 bulan.₂O, berputar pada kecepatan rendah selama 15-20 detik, dan disentrifikasi pada kecepatan rendah selama 15-20 detik.

3) Persiapan Campuran PCR Real-Time

A) Buka bungkus vakum dan keluarkan strip 8 tabung yang berisi reagen. periksa pelet berada di bagian bawah tabung (potong jumlah tabung yang diperlukan jika diperlukan).Jika tabung yang disediakan tidak kompatibel dengan instrumen Anda, pindahkan pelet reagen ke tabung optik yang kompatibel dengan instrumen Anda.

B) Buka tabung dan buang tutupnya (tidak cocok untuk mesin PCR real-time), dan persiapkan campuran reaksi pada es seperti di bawah ini.

* Air bebas nuklease dapat digunakan sebagai kontrol negatif.

• Tutup PCR dengan menggunakan tutup (strips) yang cocok untuk PCR real-time (tidak disediakan).

D) Vortex tabung pada kecepatan rendah selama 10 ~ 15 detik, dan sentrifugasi pada 3000rpm selama 20 detik dan menempatkan mereka dalam instrumen PCR real-time.

2) Pengaturan RT-PCR

Atur volume reaksi menjadi 25μl, dan prosedur amplifikasi PCR sebagai berikut.

3) Analisis dan Interpretasi Hasil